卷 26·編號20·2008年7月10日

來自加利福尼亞州聖地亞哥海軍醫療中心血液學和醫學腫瘤學部；休斯頓堡布魯克陸軍醫療中心普外科；德克薩斯州休斯敦休斯頓安德森癌症中心；華盛頓州沃爾特里德陸軍醫療中心內科、血液學和醫學腫瘤科；華盛頓特區華特里德陸軍醫療中心內科、血液學和醫學腫瘤學服務部；癌症Vc；華盛頓特區沃爾特里德陸軍醫療中心內科、血液學和醫學腫瘤學服務部；癌症Vc；華盛頓特區沃爾特里德陸軍醫療中心內科、血液學和內科腫瘤學服務部；癌症Vc；美國德克薩斯州休斯敦安德森癌症中心；華盛頓沃爾特里德陸軍醫療中心內科、血液學和內科腫瘤學服務部喬伊斯·默薩乳房護理中心，温伯醫療中心，賓夕法尼亞州温德伯；以及抗原快遞，馬薩諸塞州沃切斯特。

已提交 2007年12月15日；

已接受 2008年3月25日。

由美國軍事癌症研究所、健康科學軍裝大學外科系、沃爾特里德陸軍醫學中心臨牀調查部和Antigen Express Inc.提供支持。

本文中包含的 觀點或主張是作者的私人觀點，不應被解釋為官方觀點或反映陸軍、海軍部門或國防部的觀點。 本文中包含的觀點或主張是作者的私人觀點，不得解釋為官方觀點或反映陸軍部門、海軍部門或部門的觀點

新型II-Key混合預防HER-2/的一期臨牀試驗結果 紐多肽(AE37)疫苗

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伊麗莎白·A·米滕多夫、詹姆斯·L·默裏、阿斯娜·阿明、戴安娜·克雷格、埃裏克·馮·霍菲、薩提巴蘭·龐尼亞和喬治·E

A B S T R A C T

目的

HER-2/Neu 在乳腺癌中過度表達，是免疫原肽的來源。CD4+

HER-2/的T輔助分子 肽紐正在疫苗試驗中進行評估。與未經修飾的II類表位相比，添加由四個氨基酸組成的LRMK修飾的II-KEY提高了疫苗效力。我們介紹了HER-2/II-Key雜交種的首次人類第一階段試驗的結果 。紐多肽(AE37)疫苗在無疾病、淋巴結陰性的乳腺癌患者中的應用。

患者 和方法

劑量遞增試驗包括五個劑量組，以確定雜交肽(100µg、500µg、1000µg)和粒-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF；範圍為0至250µg)的安全性和最佳劑量。在有明顯局部毒性的情況下，GM-CSF(或在沒有GM-CSF的情況下為肽)減少50%。通過遲髮型超敏反應和[3H]胸腺嘧啶核苷對雜交瘤AE37(LRMK陽性HER-2/)細胞增殖的影響紐：776-790) 和AE36(未修改的HER-2/紐:776-790).

結果

所有15名患者均完成試驗，無3至5級毒性反應。47%的患者劑量減少。在第二組 (肽，500µg；GM-CSF，250µg)中，所有患者都需要減少劑量，促使 第三組僅接種肽。該疫苗在體外和體內誘導了對AE37和AE36的劑量依賴性免疫反應。

結論

如果劑量適當，AE37混合疫苗似乎安全，耐受性好，毒性最小。AE37

是否能夠引誘她-2/紐-特異性免疫反應，即使不使用佐劑也是如此。這項試驗代表了人類對II鍵修飾的第一次體驗，據我們所知，AE37是第一種在沒有免疫佐劑的情況下顯示效力的多肽疫苗 。

J Clin Oncol26：3426-3433。©2008美國臨牀腫瘤學會

2/紐-陽性 乳腺癌。^7,8到目前為止，他們已經

防禦工事。

在本文的末尾可以找到作者披露的潛在的感興趣的衝突和作者的構思。

通訊作者：科爾·喬治·E·People，醫學博士，FACS，外科，普外科服務，布魯克陸軍醫療中心，3851 Roger Brooke Dr，Fort Sam Houston，TX，78234；電子郵件：george.People@amedd.army.mil。

© 2008，美國臨牀腫瘤學會

0732-183X/08/26203426/$20.00 DOI：10.1200/JCO.2007.15.7842

引言

乳腺癌是女性最常見的癌症。治療是多模式的，包括手術、化療、放射治療和免疫治療， 如上所述。^1,2 儘管進行了強化治療，許多女性仍有高危特徵，如HER-2過度表達(br}HER-2/紐蛋白質，會發展成複發性疾病。³HER-2/紐是表皮生長因子受體家族的成員，通常在胎兒發育過程中表達，在30%的乳腺癌中過度表達。⁴這種蛋白 也是免疫原肽的來源。^5,6

HER-2免疫原肽 /紐激發晚期細胞毒性T淋巴細胞(CTL)識別和殺傷HER-2/紐-在體外表達 癌細胞。^5,6其中一些肽(E75和GP2)正被用作HER患者的臨牀疫苗。

研究表明，E75激發抗原特異性免疫是安全有效的；更重要的是，我們發現E75賦予的免疫似乎在減少乳腺癌復發方面有臨牀益處。⁹ 不幸的是，如果沒有加強疫苗接種，疫苗誘導的免疫是無法持續的。^9,10CD4型⁺ 可能需要輔助性T肽來提高誘導和建立長期免疫的效率。^11,12

CD4型⁺ HER的T輔助肽-2/紐第一個是G89(HER-2/紐：777-789)，作者：Tuttle et al。¹³類似肽(HER-2/紐：776-790)與Disis等人的另外兩個肽結合使用，¹⁴ 產生鼓舞人心的免疫應答。增加T輔助細胞抗原特異性刺激的一種新方法是使用不變蛋白(II-KEY)。SPE-實際上，四個氨基酸序列的添加

Ii-Key 混合HER-2/紐多肽(AE37)疫苗

將(LRMK) 添加到輔助性T多肽中，可促進主要組織相容性複合體(MHC)Ⅱ類分子在細胞表面的抗原表位直接充電。(LRMK) 可促進主要組織相容性複合體(MHC)Ⅱ類分子在細胞表面的抗原表位直接充電。^15,16 與未經修飾的II類表位相比，這種增強的表位充電和伴隨的抗原提呈增加可以 將效價提高250倍或更多。^17,18動物模型已經顯示使用黑色素瘤多肽的II-Key雜交方法是高效的，但到目前為止還沒有應用這種雜交肽的人類數據。¹⁹AE37是HER-2/紐肽776-790(AE36)。我們已經在HER-2/中進行了AE37肽疫苗的Ib期試驗。紐-陽性乳腺癌患者記錄安全性並測量對不斷增加的疫苗劑量的免疫學 反應。這裏報告了II-Key混合技術的首次人體試驗結果。

患者 和方法

患者 特徵和臨牀方案

試驗是機構審查委員會批准的，並在沃爾特里德陸軍醫學中心(華盛頓特區)進行， 新藥申請#12,229。所有患者在入選前都有經組織學證實的、淋巴結陰性的乳腺癌，並完成了標準的手術、化療和放療(根據需要)療程 。接受激素治療的患者繼續他們的 方案。經過適當的諮詢/治療，入選乳腺癌患者進行HLA分型(DNA基因組分型)。在接種疫苗之前， 患者用一組召回抗原(Mantoux試驗)進行皮試。如果患者對兩種或兩種以上抗原有反應(>5 mm)，就被認為是免疫活性的。

疫苗

II鍵/HER-2/紐MHC II類肽AE37(Ac-LRMKGVGSPYVSRLLGICL-NH2)由NeoMPS Inc.(加利福尼亞州聖地亞哥)按照聯邦指南現行良好製造規範進行商業化生產。多肽純度(>95%)經高效液相色譜和質譜鑑定。製造商進行了無菌和一般安全性測試。 凍幹肽在0.5mL以下濃度的無菌鹽水中重組：100µg、500µg、 和1000µg。將該肽與粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)(西雅圖，伯萊克斯，華盛頓州) 以不同濃度混合在0.5mL(表1)中(表1)，以不同濃度將凍幹肽與粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)(西雅圖，伯萊克斯，華盛頓州) 以不同濃度混合(表1)。將1.0mL的疫苗分開，在同一肢體相距5 cm的兩個部位皮內注射。

疫苗接種 系列

研究以劑量遞增試驗的形式進行，以確定疫苗和GM-CSF的最佳劑量。每個劑量組包括3名 名患者。前三個劑量組(患者A1-A9)接受了遞增量的AE37肽和固定的GM-CSF初始劑量 (表1)。GM-CSF劑量是根據我們之前的E75試驗選擇的。對於100 mm或以上的局部反應或2級全身毒性，GM-CSF在隨後的接種中減少了50%。100毫米的截止值是根據以前的經驗確定的； 在

100 mm或更大時，這些部位會變得融合，局部毒性增加，我們的目標是將毒性降至最低，防止皮膚 破裂。所有患者每月接種6次疫苗。由於500：250：6組(患者A4-A6)中的每個患者都需要多次減少GM-CSF，因此1,000：0：6組(患者A7-A9)接種時不接種GM-CSF。此組中有一名患者(1,000：0：6) 在接種1-3次時未出現局部反應，因此在第四次接種時，恢復GM-CSF以產生局部反應 。隨後的兩個劑量組(患者A10-A15)接受了固定劑量的AE37(500微克)和不同的GM-CSF(表1)。

毒性

患者 在接種疫苗後1小時觀察即刻過敏反應，並在48至72小時後返回接受注射部位 測量和詢問局部/全身毒性。毒副作用採用美國國家癌症研究所通用的3.0版不良事件術語標準(0-5分)進行分級。只有在較低劑量組未發生明顯毒性的情況下，才會發生從一個劑量組到下一個劑量組的進展 。

控制 肽和蛋白質

本研究中使用的AE37肽(Ac-LRMKGVGSPYVSRLLGICL-NH2)是II-Key肽(LRMK)與天然HER-2/Neu 多肽(aa776-790：GVGSPYVSRLLGICL)。評估測量的免疫反應是否代表針對 天然HER-2/的反應性紐肽，我們測定了針對HER-2/的免疫應答。紐MHCⅡ類肽，AE36(aa776-790：AC-GVGSPYVSRLLGICL-NH2)。 in

此外， 含有II-鍵肽的肽(AEN)與非HER-

2/Neu 以序列(HIV/GAG 164-181：YVDRFYKTLRAEQASQEV)為陰性對照，以破傷風類毒素(TT；List Biologals Inc，CA)為陽性對照抗原進行免疫檢測。

外周血單個核細胞分離培養

在每次接種前、疫苗系列結束後1個月(疫苗後)和6個月(長期)抽血 。抽取40毫升 血液，分離外周血單個核細胞(PBMC)。PBMC洗滌後再懸浮於 培養基(RPMI-1640陽性/10%FCS陽性/青黴素/鏈黴素陽性/_L-谷氨醯胺) ，並用作淋巴細胞來源，如前所述。^7,20,21

增殖檢測

PBMC 用於使用標準放射性物質監測疫苗特異性T淋巴細胞的增殖活性[³H]胸腺嘧啶核苷摻入試驗。PBMC在沒有或存在多肽或抗原的情況下被刺激。將多肽(AE36/AE37/AEN) 或TT以三聯形式加入96圓底板，一組孔不加刺激劑，作為對照孔。多肽在兩種濃度(1和10µg/mL)下進行測試，TT在1µg/mL時使用。 將PBMCs重新懸浮在培養基中，並以3×10的比例添加⁵ 電池/200微米/孔。然後將培養皿放在加濕的二氧化碳孵化器中孵化4天。在孵化的第3天，用1微米/孔的放射性脈衝對井進行脈衝處理。[³H]胸腺嘧啶核苷、 和平板返回培養箱。在第4天，使用細胞收割機(採集器96-MachIII；Tomtec，Orange， CT)將細胞收集到濾墊上，並使用閃爍計數器(MicroBeta Trilux，Perkin Elmer，Norwalk，CT)進行計數。用胸腺嘧啶核苷摻入量測定細胞增殖 ，以每分鐘計數為單位。計算了三重培養的平均每分鐘計數 。

遲發性超敏反應

於接種前和接種結束後1個月(長期)分別進行遲髮型超敏反應(DTH)，並將100µg AE37(不含GM-CSF)在接種前或接種後1個月(接種對側)皮內注射，與等量生理鹽水對照。用靈敏圓珠筆法測定48~72小時的DTH反應，結果採用正交平均法。²²

福爾摩斯 等人

統計 分析

P 臨牀病理因素值的計算使用Wilcoxon檢驗、Fisher‘s精確檢驗或x²根據需要測試 。P 比較疫苗接種前後增殖試驗和遲髮型超敏反應的值是使用t 根據需要進行配對或不配對測試。

結果

病人

我們 招募了15名無疾病、淋巴結陰性的乳腺癌患者並接種了疫苗，這些患者都表達不同程度的HER-2/紐( 從IHC 1+到3+)。沒有患者退出這項研究。患者人口統計、預後因素和治療概況 如表2所示。

疫苗 和疫苗接種系列

表 1提供了所採用的劑量遞增策略，圖1列舉了混合疫苗的強烈局部反應。 描述了由局部或全身反應決定的GM-CSF劑量減少(如果沒有GM-CSF，則為多肽)。劑量組 指定為肽(µg)：GM-CSF(µg)：接種次數。第一組(100：250：6)不需要減量。 然而，第二組(500：250：6)的三名患者都需要通過第三次接種減少GM-CSF的劑量。 然而，第二組(500：250：6)的三名患者都需要通過第三次接種來減少GM-CSF的劑量。考慮到明顯的局部反應，第三組(1000：0：6)在沒有GM-CSF的情況下開始接種；這組中的兩名患者需要 將肽從1000µg減少。這組中的另一名患者沒有表現出強烈的局部反應，GM-CSF在第四次接種時以逐步遞增的方式重新加入到患者的疫苗計劃中。對於後一劑量組，給予固定數量的肽(500µg)和不同劑量的GM-CSF。與500：250：6劑量組相比， 500：125：6劑量組的所有患者都出現了劑量減少，但在接種系列中的劑量較晚。500：30：6劑量組的 患者未見減少。

合併 配藥組結果

15例患者共接受90劑AE37±GM-CSF治療，無3~5級毒性反應。在所有患者中， 最大局部毒性為1級(40%)或2級(60%)。最大全身毒性

輕度，0級(13%)，1級(73%)，2級(13%)。一級毒性

包括乏力、噁心、肌痛、鼻炎、腹瀉、頭痛和咳嗽。2級毒性包括關節疼痛和僵硬。 持續時間在100 mm或以上的局部反應措施或全身2級毒性導致47%的患者減少劑量。 總體而言，疫苗是安全的，局部和全身毒性最小，如圖2A所示。

AE37肽疫苗在體外和體內均能誘導免疫應答。為了評估體外免疫反應， 我們分析了肽誘導的T淋巴細胞增殖。[³H]胸腺嘧啶核苷摻入。AE36和AE37對AE36和AE37的平均增殖應答在疫苗接種前(完成後1個月)顯著增加，而預防接種到長期 (完成後6個月；圖2B)。通過比較接種前和接種後(完成後1個月)的DTH反應，證明瞭疫苗在體內的有效性(圖2C)。總體而言，所有劑量的AE37都具有高度的免疫原性。

每劑量組毒性

圖3A和3B分別描述了各劑量組的局部毒性和全身毒性。局部毒性以500：250：6劑量組最高，100%患者出現2級毒性。全身症狀主要為1級， 只有2名患者(每個劑量組1例：1,000：0：6和500：125：6)出現2級毒性。

每個劑量組的免疫應答

增殖實驗 。所有劑量組在疫苗接種前對AE37的平均增殖反應顯著增加 (圖4A)。長期隨訪時，所有500-µg多肽劑量組的增殖反應均顯著高於預防接種。 所有500-µg多肽劑量組的增殖反應均顯著高於預防接種組(P

延遲。 所有劑量組在疫苗接種前後的DTH反應均有統計學意義的增加，並且反應 測量隨着肽劑量的增加而增強(圖4C)。GM-CSF從250µg降至125µg時，DTH反應可忽略不計，但當GM-CSF為30µg時，DTH反應顯著降低。

商榷

在我們的I期臨牀試驗中，我們已經證明AE37肽疫苗是安全有效的，可以提高HER-2/紐-只要疫苗劑量正確，在體外和體內都具有特異性 免疫力。在臨牀前模型中，II-Key雜交肽 AE37比其野生型對應物具有更強的免疫原性²³ 在檢測預先存在的HER-2/時更敏感Neu 豁免權。^18,24在我們的試驗中，劑量被要求降低到完全消除GM-CSF佐劑的程度， 證明瞭雜交肽疫苗的效力。我們第一階段測試的目標是確定安全性和最佳生物 劑量(OBD)，重點放在社區；即在不需要減少劑量的情況下刺激儘可能強的免疫反應之間取得平衡，這樣疫苗就可以安全有效地接種到大量人羣中了。(=

新型AE37混合疫苗的OBD似乎是GM-CSF大於30µg和小於125µg的500µg多肽。 OBD由多肽劑量和佐劑劑量兩部分組成。最佳AE37肽劑量(500µg)是基於以下事實 ：接受1000µg肽的患者中有兩人需要在疫苗系列結束前將肽減少到250µg以下 ，以及

Ii-Key 混合HER-2/紐多肽(AE37)疫苗

A

GM-CSF 和局部反應給藥組100：250：6

D

肽 和局部反應劑量組1000：0：6

250

200

180

150

120

A1V1 (劑量)A2V2(劑量)

1000

800

180

150

120

A7V7 (劑量)A8V8(劑量)

150

100

A3V3 (劑量)

90 A1V1(RXN)

600

A9V9 (劑量)

90 A7V7(RXN)

60

50 30

A2V2 (RXN)A3V3(RXN)

400

60 A8V8(RXN)

0 0

R1 R2 R3 R4 R5 R6

疫苗編號

B

200

0

E

30

0

R1 R2 R3 R4 R5 R6

疫苗編號

A9V9 (RXN)

GM-CSF 和局部反應給藥組500：250：6

GM-CSF 和局部反應給藥組500：125：6

250

200

150

180

150

120

A4V4 (劑量)A5V5(劑量)A6V6(劑量)

125

100

75

180

150

120

A10V10 (劑量)A11V11(劑量)A12V12(劑量)

100

90 A4V4(RXN)50

60 A5V5 (RXN)

90

A10V10 (RXN)

60 A11V11(RXN)

50 30

0 0

R1 R2 R3 R4 R5 R6

疫苗編號

C

A6V6 (RXN)

25 30

0 0

R1 R2 R3 R4 R5 R6

疫苗編號

F

A12V12 (RXN)

GM-CSF 和局部反應給藥組1000：0：6

GM-CSF 與局部反應羅辛組500：30：6

125

100

75

180

150

120

30

A7V7 (劑量)

A8V8 (劑量)20

A9V9 (劑量)

180

150

120

90

A13V13 (劑量)A14V14(劑量)A15V15(劑量)

90 A7V7(RXN)

50 10

A13V13 (RXN)

60 A14V14(RXN)

60 A8V8(RXN)

30 A15V15 (RXN)

25 30

0 0

R1 R2 R3 R4 R5 R6

疫苗編號

A9V9 (RXN)

0 0

R1 R2 R3 R4 R5 R6

疫苗編號

圖 1.按劑量分組的局部反應。劑量組指定為肽(µg)：粒-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF；µg)：接種次數。持續時間>100 mm的局部反應(RXN；實線)需要GM-CSF劑量減少50%(虛線)。GM-CSF和局部反應給藥組：(A)100：250：6，(B)500：250：6，(C)1000：0：6， (E)500：125：6，(F)500：30：6。(D)多肽和局部反應給藥組1,000：0：6。(C)一名患者因反應性低而需要添加GM-CSF，但(D)兩名患者因反應強烈而要求減少多肽劑量。

接受500微克AE37治療的所有患者均顯示出顯著的免疫反應，且持續時間較長(圖4)。 我們建議GM-CSF劑量為62.5微克，因為250和125微克的免疫調節劑的劑量分別為100微克和125微克。 我們建議將GM-CSF的劑量定為62.5微克。

VANT 在免疫學上相同，但有顯著的局部和全身反應，需要減少劑量，而30µg 耐受性良好，但免疫應答降低。

福爾摩斯 等人

A 聯合劑量組100 80 60 40 20 0級 1級2級0級1 2級最大局部毒性最大系統毒性B增殖 聯合劑量組對AE36和AE37的最大局部毒性和系統毒性B增殖 聯合劑量組12,000 9,159,000AE36 6,427 AE37 6,000 2,249 2,294,000，56 34 0 Pre 後長期C 疫苗接種前和疫苗後DTH反應，劑量組合計70 56 60 50 40 30 20 10 3.6 2.4 0.8 0對照 多肽控制 多肽疫苗前 疫苗後

圖3.按劑量分組的最大(A)局部毒性和(B)全身毒性。在每次接種後對每個患者進行毒性評估 ，並按照通用毒性標準進行分級，每個患者的最大局部和全身毒性以劑量組的百分比表示。

圖 2.聯合毒性和免疫應答。(A)最大(最大)局部和全身毒性。(B)AE36和AE37對AE36和AE37的增殖反應(均值±SE)分別在疫苗接種前和疫苗後顯著增加(PP 對於 AE36=0.03；P 對於AE37=.0002)和長期(P AE36=0.02；P 對於AE37=.00001)。(C)所有劑量組在疫苗接種前後的遲發性超敏反應 (DTH；均值±SE)(疫苗前至疫苗後DTHP = .0001).

GM-CSF 已在我們實驗室作為免疫佐劑使用，這是基於之前動物和人體乳房試驗的數據。²⁵ 還有黑色素瘤。²⁶一項黑色素瘤的隨機臨牀試驗顯示GM-CSF和Q2-21優於不完全弗氏佐劑。²⁶即使在低劑量下(26，27)，62.5-µg GM-CSF劑量也符合這些發現。我們正在進行這一劑量的第二階段試驗，進一步研究AE37混合疫苗。如上所述，我們的目標是以穩定的劑量提供安全的疫苗，在普通公眾中激發可重複的免疫反應。

肽疫苗試驗已經進行了很多年，主要集中在刺激CTL上，CTL可以直接殺死腫瘤細胞，但缺乏持久的免疫力。這種AE37肽疫苗專注於刺激CD4⁺ 輔助性T細胞有兩個目標：免疫邏輯記憶和對CTL的持續刺激。²⁸ 這個概念是

Ii-Key 混合HER-2/紐多肽(AE37)疫苗

A 每個劑量組對AE37的增殖反應21,000 16,169 長期給藥前18,000 12,450 15,000 7,149 8,264 10,46712,000 6,078 9,000 6,674 6,000 3,461 2,309 3,288 62 0 0 109 0 0 100：250：6 500：250：6 1000：0：6 500：125：6 500：30：6 B每個劑量組對AE36的增殖反應10,000 5,083 長期給藥前4,332，8,000，6,704,533,870,000 1,557,000,601 519 689 43 36 141 21 0 49 0100：250：6 500：250：6 1000：0：6 500：125：6 500：30：6 C 前後每次劑量組的疫苗潛伏期應答100 77.5 75.3 65.7疫苗接種後80 46.7 60 40 20 14.7 6.8 8.3 2.8 0 0 0 100：250：6 500：250：6 1000：0：6 500：125：6 500：30：6

正在被包括迪西斯等人在內的其他人研究，²⁹ 他們正在用II類多肽疫苗進行乳腺癌臨牀試驗。在黑色素瘤中，還有其他II類多肽疫苗在臨牀試驗中，但這是第一次使用II-Key修飾的臨牀試驗 。^30-33

AE37混合疫苗的設計目的是克服多肽疫苗的一些問題。通過利用II-key 蛋白與II類MHC分子的相互作用，AE37能夠直接將HER-2/MHC的抗原表位 帶入MHC II類分子。紐繞過正常的抗原處理途徑。然後，這種抗原可以被呈遞給免疫系統， 刺激特定的CD4陽性T淋巴細胞反應。與未經修飾的表位相比，這些II-key/抗原表位雜交物在體外顯示的效價是未修飾表位的250倍或更高。^17,18由於這些雜交物在刺激免疫應答方面的效力增加，有人認為，表位與MHCⅡ類分子之間的相互作用效率較低，因此這些雜交物可能在具有HLA等位基因的個體中活躍，而野生型表位 與其相互作用很弱。

在我們的手中，雜交疫苗AE37是足夠有效的，有時多肽不需要使用免疫佐劑GM-CSF。 歷史上，多肽本身的免疫原性最低，需要與免疫佐劑共同注射才能誘導可檢測到的T細胞反應。^34,35第二劑量組(500：250：6)的局部和全身反應使所有三名患者都需要減少劑量 ，因此第三劑量組(1000：0：6)開始時不使用GM-CSF。如前所述，該組三名患者中有兩名在沒有GM-CSF的情況下出現了強烈的局部反應，需要減少肽劑量。此外，其他劑量組中的三名患者需要減少GM-CSF到只接受肽類疫苗接種的程度。在DTH反應中可以看到疫苗效力的進一步證據；AE37的DTH反應是最佳劑量的E75肽疫苗 患者的兩倍。⁹據我們所知，這是第一種不需要免疫佐劑的人體試驗多肽疫苗。

刺激 CD4⁺ T輔助細胞被認為是長期免疫的關鍵，但人們一直擔心這些細胞中的一部分與組織破壞、腫瘤發生和自身免疫性疾病有關。¹¹與這些 病理相關的細胞被歸類為CD4⁺CD 25⁺Foxp3陽性的T調節細胞(Tregs)。^36,37 因為這些理論上的擔憂，也因為乳腺癌患者的Tregs升高，³⁸ 我們已在 我們的AE37試驗中測量了Tregs。儘管CD4細胞總數沒有變化⁺ 人羣(預防接種佔52.4%，接種後佔51.0%；P=.5)，經FoxP3(1+)檢測，9例患者Tregs有統計學意義的降低(接種前2.1%，接種後1.0%；P=.0008)。對所有15名AE37試驗患者的進一步分析目前正在進行中(手稿正在準備中)。^39,40 目前，尚不清楚Tregs的減少是多肽疫苗還是免疫佐劑的結果；這在我們的II期試驗中得到了解決，該試驗使用了一支僅由GM-CSF組成的對照手臂。

多肽疫苗的一個限制是多肽優先與某些MHC I和II類分子結合。E75(HER-2/ 紐：369-377)與HLA-A2陽性/A3陽性患者結合，Tuttle^13,41,42提示HLA-DR4陽性患者優先識別G89肽；然而，Salazar等人⁴³有

圖4.不同劑量AE37疫苗的免疫學反應(A)AE37和(B)AE36對(A)AE37和(B)AE36的增殖反應(Mean±SE)分別為(A)AE37和(B)AE36的增殖反應(Mean±SE)增加到疫苗後(後1個月)和長期(完成後6個月) 。(C)遲髮型超敏反應(DTH；Mean±SE)。黑石物理服務器， 次/分鐘。

提出了 發現AE37的親本表位HER-2/紐：776-790(包含G89)與多種MHC類 II等位基因相互作用。AE37中的II-key部分是否會給HE2/帶來額外的MHC II類亂交紐其包含的表位 尚不清楚。

福爾摩斯 等人

在表明結合偏好的劑量組內發現了可變性 。正在進行其他研究，以確定該特定疫苗的最佳HLA-DR 類型。

HER-2/有許多潛在的和理論上的優勢紐-直接接種疫苗療法與曲妥珠單抗等其他直接療法的比較。這些優點包括易於給藥、降低全身毒性、廣泛適用於所有級別的HER-2/紐表達(1+到3+)，最重要的是，刺激廣泛的免疫反應，包括 記憶反應，並在治療完成後繼續受益。

綜上所述，AE37混合疫苗似乎是安全的，並引起了HER-2/紐-特異性免疫反應，即使不使用輔助劑 。AE37疫苗的多中心第二階段試驗目前正在進行中，以進一步評估這些有趣的發現。 最終，我們的目標是開發一種組合多表位疫苗，直接和間接刺激抗原特異性CTL反應。

雖然 所有作者都完成了披露聲明，但下列作者指出了與本文考慮的主題相關的財務或其他利益 。標記的某些關係

使用 “U”表示未獲得補償的關係；標記為“C”的關係已得到補償。 有關披露類別的詳細説明，或有關ASCO利益衝突政策的更多信息， 請參閲作者披露聲明和信息 中的潛在利益衝突披露部分。

就業 或領導職位：Antigen Express Inc(C)顧問或顧問：無股權： Eric von Hofe，Antigen Express Inc榮譽：無研究基金：George

E. People，Antigen Express Inc專家證詞：無其他報酬：無

作者 投稿

構思和設計：George E.People財務支持：Eric von Hofe提供研究材料或患者：George E.People收集和彙編數據：Jarrod P.Holmes，Matthew T.Hueman，Asna Amin，Sathibalan Ponniah，George E.People：Jarrod P.Holmes，Matthew T.Hueman，Asna Amin，Sathibalan Ponniah，George E.People

數據分析和解釋：Jarrod P.Holmes，Linda C.Benavides，Jeremy D.Gates，Mark G.Carmichael，Matthew T.Hueman， Elizabeth A.Mittendorf，James L.Murray，Dianna Craig，Sathibalan Ponniah，

喬治·E·E·人民

手稿 撰寫：Jarrod P.Holmes，Linda C.Benavides，Jeremy D.Gates，Mark G.Carmichael，Sathibalan Ponniah，George E.People 手稿最終批准：George E.People

參考文獻

1. 國家癌症研究所SEER監測流行病學和最終結果癌症統計回顧，1975-2003：彙總數字 和表格。2006年。Http://seer.cancer.gov/csr/1975_2003/

2.JoensuH，Kellokumpu-Lehtinen PL，Bono P等：多西紫杉醇或長春瑞濱聯合或不聯合曲妥珠單抗治療乳腺癌。N Engl J Med 354：809-820,2006

3.Pritchard Ki，Shepherd Le，O‘Malley FP，等：HER2與乳腺癌對輔助化療的反應性。N Engl J Med 354：2103-2111,2006。

4. Slamon DJ，Godolphin W，Jones LA等：HER-2/的研究紐原癌基因在人類乳腺癌和卵巢癌中的作用。科學244：707-712,1989。

5.Fisk B，Blevins TL，Wharton JT等：卵巢腫瘤特異性CTL系識別的HER2/neu原癌基因免疫優勢肽的鑑定。J Exp Med 181：2109-2117,1995

6. GE，Goedesburre PS，Smith R等人：乳腺癌和卵巢癌特異性細胞毒性T淋巴細胞識別相同的 HER2/紐-衍生肽。美國科學院學報92：432-436,1995

7. People GE，Gurney JM，Hueman MT等：HER2/的臨牀試驗結果紐(E75)預防高危乳腺癌患者復發的疫苗。J Clin Oncol23：7536-7545,2005

8. Mittendorf E，Storrer C，Foley R：HER2/neu衍生多肽GP2用於多肽乳腺癌疫苗試驗的評估 。癌症106：2309-2317,2006

9. People GE，Holmes JP，Hueman MT等：HER2/的聯合臨牀試驗結果紐(E75)預防高危乳腺癌患者復發的疫苗 ：美國軍事癌症研究所臨牀試驗小組研究I-01 和I-02。臨牀癌研究報告14：797-803,2008

10. Knutson KL，Schiffman K，Cheever MA等：用HER-2/neu，HLA-A2肽，p369-377免疫癌症患者，結果 短命肽特異性免疫。臨牀癌研究報告8：1014-1018,2002

11.Knutson KL，Disis ML：腫瘤抗原特異性T輔助細胞在腫瘤免疫和免疫應答中的作用。癌症免疫其他 54：721-728,2005

12.Knutson KL，Disis ML：增強癌症中的T輔助細胞免疫。Curr藥物靶點免疫內分泌代謝紊亂5：365-371， 2005

13.Tuttle TM，Anderson BW，Thompson we等：乳腺癌患者對Ⅱ類HER-2/neu相關肽的增殖和細胞因子反應 。臨牀癌症研究報告4：2015-2024,1998年

14. Disis ML，Grabstein KH，Sleath PR等：對HER-2免疫的生成紐使用肽基疫苗研究乳腺癌和卵巢癌患者的致癌蛋白。臨牀癌研究報告5：1289-1297,1999

15.Adams S，Humphreys RE：不變鏈肽增強或抑制主要組織相容性複合體II類分子提呈抗原肽。“歐洲日報”25：1693-1702,1995

16.徐明，李軍，古爾福，等：MHCⅡ類變構位點藥物：治療惡性腫瘤、感染性疾病和自身免疫性疾病的新免疫療法 。Scan J Immunol 54：39-44,2001

17. Humphreys RE，Adams S，Koldzic G等：通過連接II-Key肽提高MHC II類呈遞表位的效力。疫苗18：2693-2697,2000

18. Gillogly ME，Kallinteris NL等人：II-Key/Her-2/紐乳腺癌MHCⅡ類抗原表位疫苗肽。 癌症免疫其他53：490-496,2004

19. Kallinteris NL，Wu S，Lu X，等人：DR4轉基因小鼠中CD4+T細胞對連接基因II-key片段的雜交肽的增強反應( Kallinteris NL，Wu S，Lu X，et al：增強CD4+T細胞對雜交肽的反應)

黑色素瘤gp100(48-58)MHCⅡ類表位的不變鏈。J Immunther 28：352-358,2005

20. Hueman MT，Dehqanzada Za，Novak te等：HER-2的第一階段/紐肽(E75)用於預防高危前列腺癌患者前列腺特異性抗原復發。臨牀癌研究報告11：7470-7479,2005

21. Woll MM，Fisher CM，Ryan GB等：使用HLA-A2：IG二聚體直接測量多肽特異性CD8+T細胞以監測體內對HER2/的免疫應答紐乳腺癌和前列腺癌患者的疫苗。J臨牀免疫24：449：461,2004

22. Sokal je：延遲皮膚測試反應的測量。N Engl J Med 293：501-502,1975

23.[br}Voutsas If，Gritzapis AD，Mahela LG等：輔助劑HER-2/誘導CD4+T細胞介導的抗腫瘤反應Neu 與不變鏈的II-鍵部分相連的肽。INJ癌症121：2031-2041,2007

24. Sotiriadou NN，Kallinteris NL，Gritzapis AD等：II-Key/Her-2/紐(776-790)雜交肽在HER-2/患者淋巴細胞培養中誘導比天然肽更有效的免疫應答 紐+腫瘤。癌症免疫 免疫其他56：601-613,2007

25.Disis ML，Bernhard H，Shiota FM等：粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子：蛋白質和肽類疫苗的有效佐劑。血液88：202-210,1996

26.Shaed SG，Klimek VM，Panageas KS等：HLA中針對酪氨酸酶368-376(370D)肽的T細胞應答_*A0201+ 黑色素瘤患者：不完全弗氏佐劑、粒-巨噬細胞集落刺激因子和QS-21作為免疫佐劑的隨機試驗。臨牀癌研究報告8：967-972,2002

27.Parmiani G，Castelli C，Pilla L等：癌症患者應用GM-CSF作為萬能佐劑的相反免疫功能，Ann Oncol18：226-232,2007

Ii-Key 混合HER-2/紐多肽(AE37)疫苗

28.Kalams SA，Walker BD：CD4在維持有效的細胞毒性T淋巴細胞反應方面的關鍵需求。J Exp Med 188：2199-2204,1998

29.Disis ML，Gooley TA，Rinn K等：HER-2/neu多肽疫苗免疫後產生對HER-2/neu蛋白的T細胞免疫。J Clin Oncol20：2624-2632,2002

30. Wong R，Lau R，Change J，等：III/IV期黑色素瘤切除患者對II類輔助肽表位的免疫應答 。臨牀癌研究報告10：5004-5013,2004

31. Phan GQ，Touloukian CE，Yang Jc，等人：使用來自黑色素瘤相關抗原的I類和II類限制性多肽對轉移性黑色素瘤患者進行免疫。J免疫其他26：349-356,2003

32.小林H，Lu J，Celis E：gp100 Mela-noma腫瘤抗原中包含細胞毒性T細胞表位的輔助T細胞表位的鑑定癌症資源61：7577-7584,2001

33.[br]Kallinteris NL，Lu X，Wu S，等：HIVⅡ-KEY/MHCⅡ類表位雜交肽疫苗。疫苗21：4128-4132,2003

34.Ja？Eger E，Bernhard H，Romero P等人：合成黑色素瘤相關肽在體內產生細胞毒性T細胞反應：黑色素瘤相關抗原腫瘤疫苗的意義。INJ癌症66：162-169,1996

35歲。Marchand M，Van Baren N，Weynants P等：使用由基因MAGE-3編碼並由HLA-A1呈遞的抗原肽 治療化生性黑色素瘤患者觀察到的腫瘤消退。INJ Cancer 80：219-230,1999

36.Sakaguchi S，Sakaguchi N，Asano M等：表達IL-2受體前鏈(CD25)的活化T細胞維持免疫自我耐受。一種單一的自我耐受機制的崩潰會導致各種自身免疫性疾病。J Immunol 155：1151-1164， 1995

37. Fontenot JD，Gavin MA，Rudensky AY：Foxp3計劃CD4+CD25+調節性T細胞的發育和功能。NAT免疫 4：330-336,2003

38. Liyanage UK，Moore TT，Joo H等：胰腺癌或乳腺癌患者外周血和腫瘤微環境中調節性T細胞的表達增加。J Immunol 169：2756-2761,2002

39. Hueman MT，Stojadinovic A，Storrer CE等：乳腺癌患者接種HER2/疫苗後循環調節性CD4+CD25+T細胞水平降低紐多肽(E75)和GM-CSF疫苗。Br癌症治療98：17-29,2006

40.Hueman MT，Holmes JP，Storrer CE等：新型HLA-II類中CD4+CD25+FoxP3+調節性T細胞的免疫監測紐多肽疫苗在乳腺癌患者中的臨牀試驗。AnnSurg OncolS14：91,2007(增刊；節選)

41. Parker KC，Bednarek MA，Coligan je：基於單個肽側鏈的獨立結合對潛在的HLA-A2結合肽進行排序的方案。J Immunol 152：163-175,1994

42.Patil R，Holmes JP，Amin A等：HLA-A3+乳腺癌患者接種HER2/疫苗後的臨牀和免疫學反應紐-衍生肽疫苗E75，正在進行I期臨牀試驗。Br癌症治療106：S123-S124,2007(補充)

43. Salazar LG，Fikes J，Southwood S等：HER-2/對癌症患者的免疫紐-顯示 與多個II類等位基因高親和力結合的衍生多肽。臨牀癌研究報告9：5559-5565,2003

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