眼の後部への局所送達のためのHSV-1ベースのベクタープラットフォームヘイリー・N・カートライト博士1; ホルヘ・グズマン=レペ医学博士1; トレバー・J・パリー博士1; スマ・M・クリシュナン、M.S.1 1クリスタルバイオテクノロジー株式会社、ペンシルベニア州ピッツバーグ ARVO 2024年次総会プレゼンテーション #3978 目的これらの研究は、クリスタルバイオテック社によって資金提供されました。クリスタルバイオテック社は、ここで紹介した研究に貢献してくれたEyeCro社に感謝します。すべての動物研究はAAALAC認定施設で行われ、プロトコルは開始前にIACUC承認されました。すべての著者はクリスタル・バイオテック社の現在の従業員です。1Guide、NEJM 2022; 2Sabater、ARVO 2023; 3Vetencourt、NEJM 2024の現在の従業員です。謝辞/開示/参考文献結論 • 単純ヘルペスウイルス1型（HSV-1）ベースの遺伝子治療ベクターであるベレマゲネ・ゲパーパベック（B-VEC）の臨床使用は、ジストロフィー性表皮水疱症（DEB）1-3に関連する皮膚および眼関連の病状の治療に成功しています。• 基盤となるプラットフォーム技術は現在調査中です他の遺伝性眼疾患の治療にも役立つ可能性があるため、特に眼の後部への安全な導入遺伝子送達のための実行可能な経路を決定する必要があります。図 1.HSV-1ベースの蛍光レポーターベクターの単回投与（1 µL）を、網膜下注射、脈絡膜上注射、または硝子体内注射でマウスの眼に投与しました。染色とqPCRのために24時間後に目を採取しました。HSV-1-MCH = mCherry蛍光レポーター遺伝子をコードするベクトル。バイオレンダー.comで作成されました。方法：眼の後部への投与経路により、眼の炎症を最小限に抑えます。このHSV-1ベースのプラットフォーム技術により、網膜の光受容体とRPECの両方を含む、臨床的に重要な複数の細胞型を眼にほとんどまたはまったく炎症を起こさずに導入できます。これらのデータは、眼疾患、特に遺伝性網膜疾患に対するこの技術のさらなる開発に役立ちます。図 4.脈絡膜上グループと網膜下グループでは炎症細胞はほとんど観察されませんでしたが、硝子体内グループではヘマトキシリンとエオシン（H＆E）染色による軽度の炎症細胞浸潤が見られました。上のパネルは5倍で、下のパネルは10倍で画像化されています。ベクトルプラットフォームは、Co-IF 5xで視覚化されたように、光受容体と網膜色素上皮細胞（RPEC）の両方を正常に変換します（図2）。脈絡膜上注射と網膜下注射では、網膜全体にmCherryの発現が広まりましたが、硝子体内注射では、免疫蛍光（IF）染色で視覚化された角膜、虹彩、毛様体にmCherryシグナルが明らかになりました。* = 角膜図3。網膜下および脈絡膜上注射後の網膜におけるベクター細胞型の親和性は、ロドプシン（RHO; 光受容体マーカー）またはRPE65（RPECマーカー）蛍光染色によるウイルスmCherry発現の共局在化によって評価されました。DAPIは原子核を視覚化するために使用されました。脈絡膜上注射と網膜下注射ですが、硝子体内注射ではない注射は、網膜全体 D AP i/M C herr y Control 5x 硝子内 5x 網膜下 5x 網膜下 5x コントロール硝子体下網膜下 5x 網膜下 5x 5x 10x 10x 10x 亜脈絡膜全体網膜D AP i/M C、rr y R H O R PE 65 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 脈絡膜上D AP i/M C, rr y R PE 65 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 40x 亜網膜後注射; 硝子体内または脈絡膜上治療後、播種は検出限界に達しました。比較のために、げっ歯類（青）に硝子体内注射した後の眼組織のベクターゲノムコピーを示しました。血漿で観察された濃度の約4〜5対数が高いことが示されています。* * * *