卷 26·编号20·2008年7月10日

来自加利福尼亚州圣地亚哥海军医疗中心血液学和医学肿瘤学部；休斯顿堡布鲁克陆军医疗中心普外科；德克萨斯州休斯敦休斯顿安德森癌症中心；华盛顿州沃尔特里德陆军医疗中心内科、血液学和医学肿瘤科；华盛顿特区华特里德陆军医疗中心内科、血液学和医学肿瘤学服务部；癌症Vc；华盛顿特区沃尔特里德陆军医疗中心内科、血液学和医学肿瘤学服务部；癌症Vc；华盛顿特区沃尔特里德陆军医疗中心内科、血液学和内科肿瘤学服务部；癌症Vc；美国德克萨斯州休斯敦安德森癌症中心；华盛顿沃尔特里德陆军医疗中心内科、血液学和内科肿瘤学服务部乔伊斯·默萨乳房护理中心，温伯医疗中心，宾夕法尼亚州温德伯；以及抗原快递，马萨诸塞州沃切斯特。

已提交 2007年12月15日；

已接受 2008年3月25日。

由美国军事癌症研究所、健康科学军装大学外科系、沃尔特里德陆军医学中心临床调查部和Antigen Express Inc.提供支持。

本文中包含的 观点或主张是作者的私人观点，不应被解释为官方观点或反映陆军、海军部门或国防部的观点。 本文中包含的观点或主张是作者的私人观点，不得解释为官方观点或反映陆军部门、海军部门或部门的观点

新型II-Key混合预防HER-2/的一期临床试验结果 纽多肽(AE37)疫苗

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伊丽莎白·A·米滕多夫、詹姆斯·L·默里、阿斯娜·阿明、戴安娜·克雷格、埃里克·冯·霍菲、萨提巴兰·庞尼亚和乔治·E

A B S T R A C T

目的

HER-2/Neu 在乳腺癌中过度表达，是免疫原肽的来源。CD4+

HER-2/的T辅助分子 肽纽正在疫苗试验中进行评估。与未经修饰的II类表位相比，添加由四个氨基酸组成的LRMK修饰的II-KEY提高了疫苗效力。我们介绍了HER-2/II-Key杂交种的首次人类第一阶段试验的结果 。纽多肽(AE37)疫苗在无疾病、淋巴结阴性的乳腺癌患者中的应用。

患者 和方法

剂量递增试验包括五个剂量组，以确定杂交肽(100µg、500µg、1000µg)和粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF；范围为0至250µg)的安全性和最佳剂量。在有明显局部毒性的情况下，GM-CSF(或在没有GM-CSF的情况下为肽)减少50%。通过迟发型超敏反应和[3H]胸腺嘧啶核苷对杂交瘤AE37(LRMK阳性HER-2/)细胞增殖的影响纽：776-790) 和AE36(未修改的HER-2/纽:776-790).

结果

所有15名患者均完成试验，无3至5级毒性反应。47%的患者剂量减少。在第二组 (肽，500µg；GM-CSF，250µg)中，所有患者都需要减少剂量，促使 第三组仅接种肽。该疫苗在体外和体内诱导了对AE37和AE36的剂量依赖性免疫反应。

结论

如果剂量适当，AE37混合疫苗似乎安全，耐受性好，毒性最小。AE37

是否能够引诱她-2/纽-特异性免疫反应，即使不使用佐剂也是如此。这项试验代表了人类对II键修饰的第一次体验，据我们所知，AE37是第一种在没有免疫佐剂的情况下显示效力的多肽疫苗 。

J Clin Oncol26：3426-3433。©2008美国临床肿瘤学会

2/纽-阳性 乳腺癌。^7,8到目前为止，他们已经

防御工事。

在本文的末尾可以找到作者披露的潜在的感兴趣的冲突和作者的构思。

通讯作者：科尔·乔治·E·People，医学博士，FACS，外科，普外科服务，布鲁克陆军医疗中心，3851 Roger Brooke Dr，Fort Sam Houston，TX，78234；电子邮件：george.People@amedd.army.mil。

© 2008，美国临床肿瘤学会

0732-183X/08/26203426/$20.00 DOI：10.1200/JCO.2007.15.7842

引言

乳腺癌是女性最常见的癌症。治疗是多模式的，包括手术、化疗、放射治疗和免疫治疗， 如上所述。^1,2 尽管进行了强化治疗，许多女性仍有高危特征，如HER-2过度表达(br}HER-2/纽蛋白质，会发展成复发性疾病。³HER-2/纽是表皮生长因子受体家族的成员，通常在胎儿发育过程中表达，在30%的乳腺癌中过度表达。⁴这种蛋白 也是免疫原肽的来源。^5,6

HER-2免疫原肽 /纽激发晚期细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别和杀伤HER-2/纽-在体外表达 癌细胞。^5,6其中一些肽(E75和GP2)正被用作HER患者的临床疫苗。

研究表明，E75激发抗原特异性免疫是安全有效的；更重要的是，我们发现E75赋予的免疫似乎在减少乳腺癌复发方面有临床益处。⁹ 不幸的是，如果没有加强疫苗接种，疫苗诱导的免疫是无法持续的。^9,10CD4型⁺ 可能需要辅助性T肽来提高诱导和建立长期免疫的效率。^11,12

CD4型⁺ HER的T辅助肽-2/纽第一个是G89(HER-2/纽：777-789)，作者：Tuttle et al。¹³类似肽(HER-2/纽：776-790)与Disis等人的另外两个肽结合使用，¹⁴ 产生鼓舞人心的免疫应答。增加T辅助细胞抗原特异性刺激的一种新方法是使用不变蛋白(II-KEY)。SPE-实际上，四个氨基酸序列的添加

Ii-Key 混合HER-2/纽多肽(AE37)疫苗

将(LRMK) 添加到辅助性T多肽中，可促进主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子在细胞表面的抗原表位直接充电。(LRMK) 可促进主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子在细胞表面的抗原表位直接充电。^15,16 与未经修饰的II类表位相比，这种增强的表位充电和伴随的抗原提呈增加可以 将效价提高250倍或更多。^17,18动物模型已经显示使用黑色素瘤多肽的II-Key杂交方法是高效的，但到目前为止还没有应用这种杂交肽的人类数据。¹⁹AE37是HER-2/纽肽776-790(AE36)。我们已经在HER-2/中进行了AE37肽疫苗的Ib期试验。纽-阳性乳腺癌患者记录安全性并测量对不断增加的疫苗剂量的免疫学 反应。这里报告了II-Key混合技术的首次人体试验结果。

患者 和方法

患者 特征和临床方案

试验是机构审查委员会批准的，并在沃尔特里德陆军医学中心(华盛顿特区)进行， 新药申请#12,229。所有患者在入选前都有经组织学证实的、淋巴结阴性的乳腺癌，并完成了标准的手术、化疗和放疗(根据需要)疗程 。接受激素治疗的患者继续他们的 方案。经过适当的咨询/治疗，入选乳腺癌患者进行HLA分型(DNA基因组分型)。在接种疫苗之前， 患者用一组召回抗原(Mantoux试验)进行皮试。如果患者对两种或两种以上抗原有反应(>5 mm)，就被认为是免疫活性的。

疫苗

II键/HER-2/纽MHC II类肽AE37(Ac-LRMKGVGSPYVSRLLGICL-NH2)由NeoMPS Inc.(加利福尼亚州圣地亚哥)按照联邦指南现行良好制造规范进行商业化生产。多肽纯度(>95%)经高效液相色谱和质谱鉴定。制造商进行了无菌和一般安全性测试。 冻干肽在0.5mL以下浓度的无菌盐水中重组：100µg、500µg、 和1000µg。将该肽与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)(西雅图，伯莱克斯，华盛顿州) 以不同浓度混合在0.5mL(表1)中(表1)，以不同浓度将冻干肽与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)(西雅图，伯莱克斯，华盛顿州) 以不同浓度混合(表1)。将1.0mL的疫苗分开，在同一肢体相距5 cm的两个部位皮内注射。

疫苗接种 系列

研究以剂量递增试验的形式进行，以确定疫苗和GM-CSF的最佳剂量。每个剂量组包括3名 名患者。前三个剂量组(患者A1-A9)接受了递增量的AE37肽和固定的GM-CSF初始剂量 (表1)。GM-CSF剂量是根据我们之前的E75试验选择的。对于100 mm或以上的局部反应或2级全身毒性，GM-CSF在随后的接种中减少了50%。100毫米的截止值是根据以前的经验确定的； 在

100 mm或更大时，这些部位会变得融合，局部毒性增加，我们的目标是将毒性降至最低，防止皮肤 破裂。所有患者每月接种6次疫苗。由于500：250：6组(患者A4-A6)中的每个患者都需要多次减少GM-CSF，因此1,000：0：6组(患者A7-A9)接种时不接种GM-CSF。此组中有一名患者(1,000：0：6) 在接种1-3次时未出现局部反应，因此在第四次接种时，恢复GM-CSF以产生局部反应 。随后的两个剂量组(患者A10-A15)接受了固定剂量的AE37(500微克)和不同的GM-CSF(表1)。

毒性

患者 在接种疫苗后1小时观察即刻过敏反应，并在48至72小时后返回接受注射部位 测量和询问局部/全身毒性。毒副作用采用美国国家癌症研究所通用的3.0版不良事件术语标准(0-5分)进行分级。只有在较低剂量组未发生明显毒性的情况下，才会发生从一个剂量组到下一个剂量组的进展 。

控制 肽和蛋白质

本研究中使用的AE37肽(Ac-LRMKGVGSPYVSRLLGICL-NH2)是II-Key肽(LRMK)与天然HER-2/Neu 多肽(aa776-790：GVGSPYVSRLLGICL)。评估测量的免疫反应是否代表针对 天然HER-2/的反应性纽肽，我们测定了针对HER-2/的免疫应答。纽MHCⅡ类肽，AE36(aa776-790：AC-GVGSPYVSRLLGICL-NH2)。 in

此外， 含有II-键肽的肽(AEN)与非HER-

2/Neu 以序列(HIV/GAG 164-181：YVDRFYKTLRAEQASQEV)为阴性对照，以破伤风类毒素(TT；List Biologals Inc，CA)为阳性对照抗原进行免疫检测。

外周血单个核细胞分离培养

在每次接种前、疫苗系列结束后1个月(疫苗后)和6个月(长期)抽血 。抽取40毫升 血液，分离外周血单个核细胞(PBMC)。PBMC洗涤后再悬浮于 培养基(RPMI-1640阳性/10%FCS阳性/青霉素/链霉素阳性/_L-谷氨酰胺) ，并用作淋巴细胞来源，如前所述。^7,20,21

增殖检测

PBMC 用于使用标准放射性物质监测疫苗特异性T淋巴细胞的增殖活性[³H]胸腺嘧啶核苷掺入试验。PBMC在没有或存在多肽或抗原的情况下被刺激。将多肽(AE36/AE37/AEN) 或TT以三联形式加入96圆底板，一组孔不加刺激剂，作为对照孔。多肽在两种浓度(1和10µg/mL)下进行测试，TT在1µg/mL时使用。 将PBMCs重新悬浮在培养基中，并以3×10的比例添加⁵ 电池/200微米/孔。然后将培养皿放在加湿的二氧化碳孵化器中孵化4天。在孵化的第3天，用1微米/孔的放射性脉冲对井进行脉冲处理。[³H]胸腺嘧啶核苷、 和平板返回培养箱。在第4天，使用细胞收割机(采集器96-MachIII；Tomtec，Orange， CT)将细胞收集到滤垫上，并使用闪烁计数器(MicroBeta Trilux，Perkin Elmer，Norwalk，CT)进行计数。用胸腺嘧啶核苷掺入量测定细胞增殖 ，以每分钟计数为单位。计算了三重培养的平均每分钟计数 。

迟发性超敏反应

于接种前和接种结束后1个月(长期)分别进行迟发型超敏反应(DTH)，并将100µg AE37(不含GM-CSF)在接种前或接种后1个月(接种对侧)皮内注射，与等量生理盐水对照。用灵敏圆珠笔法测定48~72小时的DTH反应，结果采用正交平均法。²²

福尔摩斯 等人

统计 分析

P 临床病理因素值的计算使用Wilcoxon检验、Fisher‘s精确检验或x²根据需要测试 。P 比较疫苗接种前后增殖试验和迟发型超敏反应的值是使用t 根据需要进行配对或不配对测试。

结果

病人

我们 招募了15名无疾病、淋巴结阴性的乳腺癌患者并接种了疫苗，这些患者都表达不同程度的HER-2/纽( 从IHC 1+到3+)。没有患者退出这项研究。患者人口统计、预后因素和治疗概况 如表2所示。

疫苗 和疫苗接种系列

表 1提供了所采用的剂量递增策略，图1列举了混合疫苗的强烈局部反应。 描述了由局部或全身反应决定的GM-CSF剂量减少(如果没有GM-CSF，则为多肽)。剂量组 指定为肽(µg)：GM-CSF(µg)：接种次数。第一组(100：250：6)不需要减量。 然而，第二组(500：250：6)的三名患者都需要通过第三次接种减少GM-CSF的剂量。 然而，第二组(500：250：6)的三名患者都需要通过第三次接种来减少GM-CSF的剂量。考虑到明显的局部反应，第三组(1000：0：6)在没有GM-CSF的情况下开始接种；这组中的两名患者需要 将肽从1000µg减少。这组中的另一名患者没有表现出强烈的局部反应，GM-CSF在第四次接种时以逐步递增的方式重新加入到患者的疫苗计划中。对于后一剂量组，给予固定数量的肽(500µg)和不同剂量的GM-CSF。与500：250：6剂量组相比， 500：125：6剂量组的所有患者都出现了剂量减少，但在接种系列中的剂量较晚。500：30：6剂量组的 患者未见减少。

合并 配药组结果

15例患者共接受90剂AE37±GM-CSF治疗，无3~5级毒性反应。在所有患者中， 最大局部毒性为1级(40%)或2级(60%)。最大全身毒性

轻度，0级(13%)，1级(73%)，2级(13%)。一级毒性

包括乏力、恶心、肌痛、鼻炎、腹泻、头痛和咳嗽。2级毒性包括关节疼痛和僵硬。 持续时间在100 mm或以上的局部反应措施或全身2级毒性导致47%的患者减少剂量。 总体而言，疫苗是安全的，局部和全身毒性最小，如图2A所示。

AE37肽疫苗在体外和体内均能诱导免疫应答。为了评估体外免疫反应， 我们分析了肽诱导的T淋巴细胞增殖。[³H]胸腺嘧啶核苷掺入。AE36和AE37对AE36和AE37的平均增殖应答在疫苗接种前(完成后1个月)显著增加，而预防接种到长期 (完成后6个月；图2B)。通过比较接种前和接种后(完成后1个月)的DTH反应，证明了疫苗在体内的有效性(图2C)。总体而言，所有剂量的AE37都具有高度的免疫原性。

每剂量组毒性

图3A和3B分别描述了各剂量组的局部毒性和全身毒性。局部毒性以500：250：6剂量组最高，100%患者出现2级毒性。全身症状主要为1级， 只有2名患者(每个剂量组1例：1,000：0：6和500：125：6)出现2级毒性。

每个剂量组的免疫应答

增殖实验 。所有剂量组在疫苗接种前对AE37的平均增殖反应显著增加 (图4A)。长期随访时，所有500-µg多肽剂量组的增殖反应均显著高于预防接种。 所有500-µg多肽剂量组的增殖反应均显著高于预防接种组(P

延迟。 所有剂量组在疫苗接种前后的DTH反应均有统计学意义的增加，并且反应 测量随着肽剂量的增加而增强(图4C)。GM-CSF从250µg降至125µg时，DTH反应可忽略不计，但当GM-CSF为30µg时，DTH反应显著降低。

商榷

在我们的I期临床试验中，我们已经证明AE37肽疫苗是安全有效的，可以提高HER-2/纽-只要疫苗剂量正确，在体外和体内都具有特异性 免疫力。在临床前模型中，II-Key杂交肽 AE37比其野生型对应物具有更强的免疫原性²³ 在检测预先存在的HER-2/时更敏感Neu 豁免权。^18,24在我们的试验中，剂量被要求降低到完全消除GM-CSF佐剂的程度， 证明了杂交肽疫苗的效力。我们第一阶段测试的目标是确定安全性和最佳生物 剂量(OBD)，重点放在社区；即在不需要减少剂量的情况下刺激尽可能强的免疫反应之间取得平衡，这样疫苗就可以安全有效地接种到大量人群中了。(=

新型AE37混合疫苗的OBD似乎是GM-CSF大于30µg和小于125µg的500µg多肽。 OBD由多肽剂量和佐剂剂量两部分组成。最佳AE37肽剂量(500µg)是基于以下事实 ：接受1000µg肽的患者中有两人需要在疫苗系列结束前将肽减少到250µg以下 ，以及

Ii-Key 混合HER-2/纽多肽(AE37)疫苗

A

GM-CSF 和局部反应给药组100：250：6

D

肽 和局部反应剂量组1000：0：6

250

200

180

150

120

A1V1 (剂量)A2V2(剂量)

1000

800

180

150

120

A7V7 (剂量)A8V8(剂量)

150

100

A3V3 (剂量)

90 A1V1(RXN)

600

A9V9 (剂量)

90 A7V7(RXN)

60

50 30

A2V2 (RXN)A3V3(RXN)

400

60 A8V8(RXN)

0 0

R1 R2 R3 R4 R5 R6

疫苗编号

B

200

0

E

30

0

R1 R2 R3 R4 R5 R6

疫苗编号

A9V9 (RXN)

GM-CSF 和局部反应给药组500：250：6

GM-CSF 和局部反应给药组500：125：6

250

200

150

180

150

120

A4V4 (剂量)A5V5(剂量)A6V6(剂量)

125

100

75

180

150

120

A10V10 (剂量)A11V11(剂量)A12V12(剂量)

100

90 A4V4(RXN)50

60 A5V5 (RXN)

90

A10V10 (RXN)

60 A11V11(RXN)

50 30

0 0

R1 R2 R3 R4 R5 R6

疫苗编号

C

A6V6 (RXN)

25 30

0 0

R1 R2 R3 R4 R5 R6

疫苗编号

F

A12V12 (RXN)

GM-CSF 和局部反应给药组1000：0：6

GM-CSF 与局部反应罗辛组500：30：6

125

100

75

180

150

120

30

A7V7 (剂量)

A8V8 (剂量)20

A9V9 (剂量)

180

150

120

90

A13V13 (剂量)A14V14(剂量)A15V15(剂量)

90 A7V7(RXN)

50 10

A13V13 (RXN)

60 A14V14(RXN)

60 A8V8(RXN)

30 A15V15 (RXN)

25 30

0 0

R1 R2 R3 R4 R5 R6

疫苗编号

A9V9 (RXN)

0 0

R1 R2 R3 R4 R5 R6

疫苗编号

图 1.按剂量分组的局部反应。剂量组指定为肽(µg)：粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF；µg)：接种次数。持续时间>100 mm的局部反应(RXN；实线)需要GM-CSF剂量减少50%(虚线)。GM-CSF和局部反应给药组：(A)100：250：6，(B)500：250：6，(C)1000：0：6， (E)500：125：6，(F)500：30：6。(D)多肽和局部反应给药组1,000：0：6。(C)一名患者因反应性低而需要添加GM-CSF，但(D)两名患者因反应强烈而要求减少多肽剂量。

接受500微克AE37治疗的所有患者均显示出显著的免疫反应，且持续时间较长(图4)。 我们建议GM-CSF剂量为62.5微克，因为250和125微克的免疫调节剂的剂量分别为100微克和125微克。 我们建议将GM-CSF的剂量定为62.5微克。

VANT 在免疫学上相同，但有显著的局部和全身反应，需要减少剂量，而30µg 耐受性良好，但免疫应答降低。

福尔摩斯 等人

A 联合剂量组100 80 60 40 20 0级 1级2级0级1 2级最大局部毒性最大系统毒性B增殖 联合剂量组对AE36和AE37的最大局部毒性和系统毒性B增殖 联合剂量组12,000 9,159,000AE36 6,427 AE37 6,000 2,249 2,294,000，56 34 0 Pre 后长期C 疫苗接种前和疫苗后DTH反应，剂量组合计70 56 60 50 40 30 20 10 3.6 2.4 0.8 0对照 多肽控制 多肽疫苗前 疫苗后

图3.按剂量分组的最大(A)局部毒性和(B)全身毒性。在每次接种后对每个患者进行毒性评估 ，并按照通用毒性标准进行分级，每个患者的最大局部和全身毒性以剂量组的百分比表示。

图 2.联合毒性和免疫应答。(A)最大(最大)局部和全身毒性。(B)AE36和AE37对AE36和AE37的增殖反应(均值±SE)分别在疫苗接种前和疫苗后显著增加(PP 对于 AE36=0.03；P 对于AE37=.0002)和长期(P AE36=0.02；P 对于AE37=.00001)。(C)所有剂量组在疫苗接种前后的迟发性超敏反应 (DTH；均值±SE)(疫苗前至疫苗后DTHP = .0001).

GM-CSF 已在我们实验室作为免疫佐剂使用，这是基于之前动物和人体乳房试验的数据。²⁵ 还有黑色素瘤。²⁶一项黑色素瘤的随机临床试验显示GM-CSF和Q2-21优于不完全弗氏佐剂。²⁶即使在低剂量下(26，27)，62.5-µg GM-CSF剂量也符合这些发现。我们正在进行这一剂量的第二阶段试验，进一步研究AE37混合疫苗。如上所述，我们的目标是以稳定的剂量提供安全的疫苗，在普通公众中激发可重复的免疫反应。

肽疫苗试验已经进行了很多年，主要集中在刺激CTL上，CTL可以直接杀死肿瘤细胞，但缺乏持久的免疫力。这种AE37肽疫苗专注于刺激CD4⁺ 辅助性T细胞有两个目标：免疫逻辑记忆和对CTL的持续刺激。²⁸ 这个概念是

Ii-Key 混合HER-2/纽多肽(AE37)疫苗

A 每个剂量组对AE37的增殖反应21,000 16,169 长期给药前18,000 12,450 15,000 7,149 8,264 10,46712,000 6,078 9,000 6,674 6,000 3,461 2,309 3,288 62 0 0 109 0 0 100：250：6 500：250：6 1000：0：6 500：125：6 500：30：6 B每个剂量组对AE36的增殖反应10,000 5,083 长期给药前4,332，8,000，6,704,533,870,000 1,557,000,601 519 689 43 36 141 21 0 49 0100：250：6 500：250：6 1000：0：6 500：125：6 500：30：6 C 前后每次剂量组的疫苗潜伏期应答100 77.5 75.3 65.7疫苗接种后80 46.7 60 40 20 14.7 6.8 8.3 2.8 0 0 0 100：250：6 500：250：6 1000：0：6 500：125：6 500：30：6

正在被包括迪西斯等人在内的其他人研究，²⁹ 他们正在用II类多肽疫苗进行乳腺癌临床试验。在黑色素瘤中，还有其他II类多肽疫苗在临床试验中，但这是第一次使用II-Key修饰的临床试验 。^30-33

AE37混合疫苗的设计目的是克服多肽疫苗的一些问题。通过利用II-key 蛋白与II类MHC分子的相互作用，AE37能够直接将HER-2/MHC的抗原表位 带入MHC II类分子。纽绕过正常的抗原处理途径。然后，这种抗原可以被呈递给免疫系统， 刺激特定的CD4阳性T淋巴细胞反应。与未经修饰的表位相比，这些II-key/抗原表位杂交物在体外显示的效价是未修饰表位的250倍或更高。^17,18由于这些杂交物在刺激免疫应答方面的效力增加，有人认为，表位与MHCⅡ类分子之间的相互作用效率较低，因此这些杂交物可能在具有HLA等位基因的个体中活跃，而野生型表位 与其相互作用很弱。

在我们的手中，杂交疫苗AE37是足够有效的，有时多肽不需要使用免疫佐剂GM-CSF。 历史上，多肽本身的免疫原性最低，需要与免疫佐剂共同注射才能诱导可检测到的T细胞反应。^34,35第二剂量组(500：250：6)的局部和全身反应使所有三名患者都需要减少剂量 ，因此第三剂量组(1000：0：6)开始时不使用GM-CSF。如前所述，该组三名患者中有两名在没有GM-CSF的情况下出现了强烈的局部反应，需要减少肽剂量。此外，其他剂量组中的三名患者需要减少GM-CSF到只接受肽类疫苗接种的程度。在DTH反应中可以看到疫苗效力的进一步证据；AE37的DTH反应是最佳剂量的E75肽疫苗 患者的两倍。⁹据我们所知，这是第一种不需要免疫佐剂的人体试验多肽疫苗。

刺激 CD4⁺ T辅助细胞被认为是长期免疫的关键，但人们一直担心这些细胞中的一部分与组织破坏、肿瘤发生和自身免疫性疾病有关。¹¹与这些 病理相关的细胞被归类为CD4⁺CD 25⁺Foxp3阳性的T调节细胞(Tregs)。^36,37 因为这些理论上的担忧，也因为乳腺癌患者的Tregs升高，³⁸ 我们已在 我们的AE37试验中测量了Tregs。尽管CD4细胞总数没有变化⁺ 人群(预防接种占52.4%，接种后占51.0%；P=.5)，经FoxP3(1+)检测，9例患者Tregs有统计学意义的降低(接种前2.1%，接种后1.0%；P=.0008)。对所有15名AE37试验患者的进一步分析目前正在进行中(手稿正在准备中)。^39,40 目前，尚不清楚Tregs的减少是多肽疫苗还是免疫佐剂的结果；这在我们的II期试验中得到了解决，该试验使用了一支仅由GM-CSF组成的对照手臂。

多肽疫苗的一个限制是多肽优先与某些MHC I和II类分子结合。E75(HER-2/ 纽：369-377)与HLA-A2阳性/A3阳性患者结合，Tuttle^13,41,42提示HLA-DR4阳性患者优先识别G89肽；然而，Salazar等人⁴³有

图4.不同剂量AE37疫苗的免疫学反应(A)AE37和(B)AE36对(A)AE37和(B)AE36的增殖反应(Mean±SE)分别为(A)AE37和(B)AE36的增殖反应(Mean±SE)增加到疫苗后(后1个月)和长期(完成后6个月) 。(C)迟发型超敏反应(DTH；Mean±SE)。黑石物理服务器， 次/分钟。

提出了 发现AE37的亲本表位HER-2/纽：776-790(包含G89)与多种MHC类 II等位基因相互作用。AE37中的II-key部分是否会给HE2/带来额外的MHC II类乱交纽其包含的表位 尚不清楚。

福尔摩斯 等人

在表明结合偏好的剂量组内发现了可变性 。正在进行其他研究，以确定该特定疫苗的最佳HLA-DR 类型。

HER-2/有许多潜在的和理论上的优势纽-直接接种疫苗疗法与曲妥珠单抗等其他直接疗法的比较。这些优点包括易于给药、降低全身毒性、广泛适用于所有级别的HER-2/纽表达(1+到3+)，最重要的是，刺激广泛的免疫反应，包括 记忆反应，并在治疗完成后继续受益。

综上所述，AE37混合疫苗似乎是安全的，并引起了HER-2/纽-特异性免疫反应，即使不使用辅助剂 。AE37疫苗的多中心第二阶段试验目前正在进行中，以进一步评估这些有趣的发现。 最终，我们的目标是开发一种组合多表位疫苗，直接和间接刺激抗原特异性CTL反应。

虽然 所有作者都完成了披露声明，但下列作者指出了与本文考虑的主题相关的财务或其他利益 。标记的某些关系

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就业 或领导职位：Antigen Express Inc(C)顾问或顾问：无股权： Eric von Hofe，Antigen Express Inc荣誉：无研究基金：George

E. People，Antigen Express Inc专家证词：无其他报酬：无

作者 投稿

构思和设计：George E.People财务支持：Eric von Hofe提供研究材料或患者：George E.People收集和汇编数据：Jarrod P.Holmes，Matthew T.Hueman，Asna Amin，Sathibalan Ponniah，George E.People：Jarrod P.Holmes，Matthew T.Hueman，Asna Amin，Sathibalan Ponniah，George E.People

数据分析和解释：Jarrod P.Holmes，Linda C.Benavides，Jeremy D.Gates，Mark G.Carmichael，Matthew T.Hueman， Elizabeth A.Mittendorf，James L.Murray，Dianna Craig，Sathibalan Ponniah，

乔治·E·E·人民

手稿 撰写：Jarrod P.Holmes，Linda C.Benavides，Jeremy D.Gates，Mark G.Carmichael，Sathibalan Ponniah，George E.People 手稿最终批准：George E.People

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